AN0030 尿液中阿密曲替林和环苯扎林代谢物的酶水解效率评估

概述

阿密曲替林是一种广谱的三环抗抑郁药物，环苯扎林是一种三环骨骼肌松弛剂，其在代谢中均形成季铵葡萄糖苷酸复合物。为了能够精确的定量这些代谢物，需对复合物进行水解。本研究比较了四种 β-葡萄糖醛酸酶对这两种复合物的水解效率。

材料与方法

1.      药物标准品购于Cerilliant Corporation。IMCSzyme®购于Integrated Micro-Chromatography Systems, LLC。鲍鱼β-葡萄糖醛酸酶购于Campbell Science，帽贝及大蜗牛β-葡萄糖醛酸酶购于Sigma-Aldrich。

2.      样本准备：200 μL尿液+100 μL水解复合物（水解缓冲液，酶及内标）。于60℃进行水解。IMCSzyme®水解时间为30分钟，其余三种酶水解60分钟。

3.      水解后经RP-S枪头（DPX LLC）萃取，并用 LC-MS/MS 分析。

结果

图 1.  LC-MS/MS 检测两种不同三环类药物的浓度结果  (a)   阿米替林  (b) 环苯扎林。 红色表示水解前这两种分析物在尿液中的浓度。 其他为经 IMCSzyme™、花园蜗牛、笠螺和鲍鱼水解酶水解后两种不同三环类药物的浓度。

阿密曲替林与环苯扎林葡萄糖苷酸复合物能够被IMCSzyme®完全水解，其余三种酶只能部分水解，且水解时间更长（图1）。图2（b，e）显示了使用了其余三种酶进行水解时，出现若干没有水解的葡萄糖苷酸复合物的峰，而IMCSzyme®水解后无葡萄糖苷酸复合物峰（图2 c，f）。

图 2. 阿米替林 (a-c) 和环苯扎林(d-f )葡萄糖醛酸基团水解色谱图比较 ，  不使用酶 (a, d)，鲍鱼提取酶  (b, e),  IMCSzyme™ (c, f )。

结论

与三种商业化的β-葡萄糖醛酸酶相比，IMCSzyme®对阿密曲替林与环苯扎林葡萄糖苷酸复合物的水解效率显著提高，且水解时间更短。其余的酶效率低可能由于酶溶液不纯，有杂质且对底物的亲和力不同。而IMCSzyme®是一种生物工程改良的β-葡萄糖醛酸酶，其高纯度高活性的特点使得催化效率更高。