MicroSep® IMCStips Ni-IMAC 亲和层析柱

由于组氨酸标签很小并几乎不会干扰目的蛋白的功能、活性或结构,因此被广泛使用。固定化金属离子亲合层析(IMAC)是纯化组氨酸标签蛋白常用的方法。选择性地负载共价金属离子(比如镍或钴)的 IMAC 层析介质能够截留组氨酸标签蛋白,并在变性条件下,能从包涵体中纯化出不溶性的组氨酸标签蛋白。成功的 IMAC 纯化能得到高纯度、高产率、高活性的目的蛋白。

MicroSep IMCStips 使用 DPX 技术纯化重组 His 标签的蛋白质。与移液工作站的结合可以完成高通量地自动纯化。由螯合树脂组成的 IMAC 带有与组氨酸侧链配位的镍离子。Ni-IMAC 免疫复合物能有效地从细菌裂解物中纯化高水平的过表达 His 标记的融合蛋白。此外,不溶性蛋白质可以在变性条件下纯化,例如从包涵体中纯化。

特点

  • 高载量 —— 每 mL 树脂可结合高达 40 mg 的 His 标签蛋白

  • 多功能 —— 适用天然或变性条件纯化蛋白质

  • 易于使用

  • 灵活——有多种吸头尺寸和多种树脂量可供选择

  • 提供预编程软件脚本,具有直观的用户界面,可控制样本量、吸打次数和洗涤、洗脱步骤

  • Ni Sepharose 6 Fast Flow
  • Ni Sepharose excel
  • Ni-NTA Superflow

用对硝基邻苯二酚硫酸盐测定 His 标记硫酸酯酶的酶活性。每四个孔为一组,其中包含经纯化的硫酸酯酶,它将底物转化为红色溶液;在 96 孔板上对细胞裂解液纯化、洗脱,随后进行缓冲液交换。检测表明在工作流程中没有交叉污染。黄色溶液表明没有硫酸酯酶活性。  

Lane 1: 初始样品
Lane 2: 样品结合时流出溶液
Lane 3: 洗涤溶液 1
Lane 4: 洗涤溶液 2
Lane 5: 洗脱液
红色框高亮处为目标蛋白  

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