凝胶层析纯化 - 无锡微色谱生物科技有限公司

MicroSep® IMCStips 凝胶层析柱 (SEC)

用分子排阻层析柱（SEC）可以轻松地实现缓冲液置换、处理离液盐等过程，同时适用于胰蛋白酶/赖氨酸消化的胍。SizeX IMCStips 中的树脂对生物分子的低吸附性可提高生物分子的回收率。

SizeX 广泛应用于从基础研究到使用生物药进行治疗时剂量控制中的各种分析应用。在温和的分离条件下即可获得高分辨率的分离，是蛋白质分析的有效方法。枪头式设计可方便地用于缓冲液交换、处理离液盐，如 6-M 胍。SizeX 中的树脂对生物分子的低吸附性可提高生物分子的回收率。

特点

● 无需离心，即可实现缓冲液交换

● 精确的流速控制，可实现理想的尺寸分离

● 几乎无需人工干预的自动化工作过程

● 易于与其他自动化工作流程相结合，如 MAM、重组蛋白和 IgG 纯化

使用 MicroSep SizeX IMCStips 的 MAM 工作流程

Kates PA, Cook JN, Ghan R, Nguyen HJ, Sitasuwan P, Lee LA. (2023). Incorporation of automated buffer exchange empowers high-throughput protein and plasmid purification for downstream uses. SLAS technology. doi: 10.1016/j.slast.2023.01.005.
Ogata Y, Quizon PM, Nightlinger NS, Sitasuwan P, Snodgrass C, Lee LA, Meyer JD, Rogers RS. (2021). Automated multi-attribute method sample preparation using high-throughput buffer exchange tips. Rapid communications in mass spectrometry. doi: 10.1002/rcm.9222.
Sitasuwan P, Powers TW, Medwid T, Huang Y, Bare B, Lee LA. (2021). Enhancing the multi-attribute method through an automated and high-throughput sample preparation. mAbs. 13(1):1978131. doi: 10.1080/19420862.2021.1978131.

用 MicroSep SizeX IMCStips 清除小分子染料（约500Da)。

图 A 中左侧一列是处理前的样品，蓝色为小分子染料；中间一列是经过处理后的样品，右侧一列是空白的水样。结果显示，处理后样品中小分子染料的浓度约为处理前样品浓度的1/18。

利用 Hamilton™ Microlab STAR 移液工作站结合/ MicroSep SizeX IMCStips 对免疫球蛋白 (IgG) 进行提纯及分析。左侧流程图为对 IgG 进行提纯及胰蛋白酶消化处理，用 LC-MS/MS 进行分析表明蛋白纯度得到显著提高。利用 Hamilton™ Microlab STAR 对 8 个平行人源 IgG 样品进行处理，各通道的色谱/质谱图高度一致。数据充分表明 Hamilton™ Microlab STAR 移液工作站结合/ MicroSep SizeX IMCStips 在实现高通量、自动化处理的同时，也能保证多个样品平行处理的高度一致性。

在 Tecan 工作站上使用 SizeX IMCStips

SizeX IMCStips是小型化尺寸排阻色谱柱，设计用于自动、快速的缓冲液交换和脱盐。SizeX IMCStips采用亲水性聚合树脂包装，具有出色的化学和物理稳定性，适合各种应用。我们的吸头旨在与 Tecan Fluent 和 Tecan EVO 工作站无缝兼容，使您能够在不到 10 分钟的时间内快速处理八个样品。

SizeX IMCStips有效地从绿色荧光蛋白和溴酚蓝(BPB)的混合物中分离绿色荧光蛋白(GFP)。BPB 保留在吸头中，而 GFP 在 SizeX 处理后洗脱。吸收光谱显示了含有 GFP 和 BPB 的初始混合物(SizeX 前样品)和用 SizeX 处理后的纯化 GFP 的光谱(SizeX 后)之间的差异。起始样品代表前 SizeX 样品的 GFP 部分的解卷积光谱。虚线表示小分子BPB的浓度降低了 256 倍以上。

在 TECAN FLUENT 1080 上使用SIZEX IMCSTIPS 进行自动缓冲液交换

绿色荧光蛋白(GFP)的各种起始浓度的蛋白回收率范围为0.1-1.0 mg/mL (n=2)。在带有柔性通道臂(FCA)的Tecan Fluent 1080 上用 SizeX₁₅₀ 和 SizeX₁₀₀ 进行自动缓冲液交换。通过使用505 nm处的吸光度来测量GFP浓度。

表1 ： SizeX₁₅₀ 纯化的荧光测量结果

表2 ： SizeX150 纯化 GFP 在 505 nm 处的吸光度

表3 ： SizeX150 纯化 BPP 在 591 nm 处的吸光度

从纯绿色荧光蛋白(1 mg/mL)和绿色荧光蛋白与溴酚蓝(GFP+BPB)的组合的溶液中回收绿色荧光蛋白(GFP );1毫克/毫升的绿色荧光蛋白，0.1毫克/毫升的BPB)。在Tecan Fluent 1080 系统上使用SizeX₁₅₀ IMCStips处理样品。通过 505 nm 和 591 nm 处的吸光度和荧光(Exλ=485 nm，Emλ=530 nm)的测量来确定产率。GFP+BPB 和只有 GFP 的样品(n=6)的平均 GFP 回收率为 94.2±6.1% (吸光度，表2)和 96.0±11.4% (荧光，表3)。从原始样品中减去 BPB (0.7098)和空白(0.038)的平均值后，使用 505 nm处的校正吸光度计算产率。

在 Dynamic Devices 工作站上使用 SizeX IMCStips

SizeX IMCStips 与 Dynamic Devices Lynx® 平台的 Verified Volume Pipetting (VVP) 和 Standard Technoloty (ST) 完美兼容。可在 15 分钟或更短时间内快速处理多达 96 个样品。

SizeX IMCStips 或 Bio-Spin P6柱用于缓冲交换 100 μL (SizeX₁₀₀)或 150 μL (SizeX₁₅₀ )样品，其中含有(A) 1 mg/mL 绿色荧光蛋白(GFP)或 (B) 1 mg/mL 人IgG (IgG)。使用 Spin 柱手动处理样品，或在 Dynamic Devices Lynx (SizeX₁₀₀、SizeX₁₅₀)上使用自动化工作流程处理样品。数据表示为平均值±标准差(n = 8)。(C)与使用旋转柱处理的样品相比，使用 SizeX₁₀₀ IMCStips 制备的样品在各种浓度的 IgG 中表现出更一致的回收率。数据表示为平均值±标准差(n = 3)。

Dynamic Devices Lynx 上的SizeX100或SizeX150 IMCStips 用于缓冲交换 100 μL 或 150 μL 样品，其中含有 9~158 μg 绿色荧光蛋白(GFP)或 8~149 μg HIgG。测量回收率，数据表示为平均值±标准差(n = 4)。

在 SizeX IMCSTips 上通过不同体积的样品

通过 NanoDrop 测量多个浓度(每个浓度n=4)的 His-tag GFP 的回收率。(A)使用SizeX₁₀₀的 100 μL 样品体积 (B)使用SizeX₁₅₀ 的 150 μL 样品体积 (C)使用 SizeX₇₅₀ 的 750 μL 样品体积 (D)使用 SizeX₁₀₀₀ 的 1000 μL 样品体积。

脱盐样品体积

1000 µL

750 µL

150 µL

100 µL

50 µL

适配工作站

Tecan

Hamilton

Analytik Jena

Opentrons

Integra

Dynamic Devices

TipSize

5 mL

1250 µL

1 mL

300 µL

200 µL

标题	货号
MicroSep® IMCStips 凝胶层析柱(R76) for Analytik Jena®, WB 1 mL, 150 µL sample load，SizeX 150 , 96 支装	02-TK-Y1 (R76-350-96)
MicroSep® IMCStips 凝胶层析柱(R76) for Analytik Jena®, WB 1 mL, 100 µL sample load，SizeX 100 , 96 支装	02-TK-Y1 (R76-220-96)
MicroSep® IMCStips 凝胶层析柱(R76) for Opentrons®, WB 1 mL, 150 µL sample load, SizeX 150 , 96 支装	02-TK-P1 (R76-350-96)
MicroSep® IMCStips 凝胶层析柱(R76) for WB 1 mL Tecan FCA ,100 µL sample load, SizeX 100 , 96 支装	02-TK-T1 （R76-220-96）
MicroSep® IMCStips 凝胶层析柱(R76) for WB 1 mL Tecan FCA , 150 µL sample load, SizeX 150 , 96 支装	02-TK-T1 （R76-350-96）
MicroSep® IMCStips 凝胶层析柱(R76) for WB 1 mL Tecan FCA , 50 µL sample load, SizeX 50 , 96 支装	02-TK-T1 （R76-140-96）
MicroSep® IMCStips 凝胶层析柱(R76) for 1 mL Hamilton® , SizeX 150 , 96 支装	02-TK-H6 （R76-350-96）
MicroSep® IMCStips 凝胶层析柱(R76) for 1 mL Hamilton® , SizeX 100 , 96 支装	02-TK-H6 （R76-220-96）
MicroSep® IMCStips 凝胶层析柱(R76) for WB 5 mL Dynamic Devices ,1000 µL sample load, SizeX 1000 , 24 支装	02-TK-D5 （R76-2600-96）
MicroSep® IMCStips 凝胶层析柱(R76) for WB 5 mL Dynamic Devices ,750 µL sample load, SizeX 750 , 24 支装	02-TK-D5 （R76-2000-24）