PO0007 利用 Hamilton ® Microlab STAR 和多种湿树脂实现高一致性小型化实验室工作流程的蛋白质自动纯化

发布于： 2026-10-14

分类： Protein A/G Ni-IMAC 应用文献 AFFINITY Hamilton 生物药提纯及分析链霉亲和素凝胶层析 IMCStips

分散移液微萃取枪头是一种专利的微萃取平台，利用移液管尖端内的湍流混合，增加松散树脂和液体样品之间的相互作用时间。将这一核心技术与高度灵活的自动化液体处理系统- Hamilton 机器人技术相结合，能够以一致的方式快速富集抗体、重组蛋白和其他各种标记蛋白。与传统的色谱柱依赖于固定床不同，分散移液枪头含有松散的树脂，在两个多孔过滤器之间有很大的空隙。这里，我们以从 1 mL 等分试样中纯化毫克级抗体，以及以 96 孔板从微培养物中纯化His 标记的重组蛋白证明了 Hamilton STAR 上微提取平台的灵活性。 “准备就绪”的工作流程提供洗脱蛋白质，通过液体处理平台上的高通量缓冲交换处理，以确保从原始样品到纯化和缓冲样品的全自动化实验室过程。

自动化工作流程是几种不同 INtip 化学的通用模板，用于纯化不同类型的靶标，从标记的重组蛋白到免疫球蛋白，然后使用 SizeX IMCStips™ 进行缓冲液交换。 IMCStips 可与不同的亲和树脂 (用于其标记的蛋白的 Ni-IMAC，用于免疫球蛋白的 Protein A/G，用于生物素化靶标的链霉亲和素) 一起使用，以靶向感兴趣的特定蛋白。这里显示的台面布局是一个通用模板，作为“准备就绪”的工作流程，用于 Hamilton Microlab STAR 上的亲和纯化。图形用户界面中的选项可以提供优化的工作流程以及最大限度地回收的灵活性，而快速纯化工作流程则可以进行快速定性分析。最终，这个自动化的工作流程提供了一致性，但是仍然增加了一些灵活性来改变工作流程(吸液/分液次数)和清洗步骤，以便为特定的目标定制每个工作流程。

图1. 控制吸液和分液循环次数的图形用户界面，以及用于亲和纯化及后续进行缓冲液交换的典型台面布局

亲和纯化方法 (Protein A, G, A/, L和 Ni-IMAC)

尺寸排阻色谱法 (SEC) SizeX

链霉亲和素

表 1. 使用 MabSelect SuRe LX 50 µL 树脂 Intip 工作流程

各种目标分析物的亲和富集是一个常规过程，贯穿于研究的早期和晚期阶段。这里展示的工作是基于自动化和高通量纯化，但仍然提供灵活性的空间，以调整过程中不同数量的样品，不同的亲和力和耦合多个工作流程，如亲和纯化后的缓冲液交换。高一致性和灵活性是实施这些用 Ni-IMAC 纯化标记蛋白工作流程时的关键点，使用 Protein A 固定树脂从细胞培养基中提取免疫球蛋白，用链霉亲和素珠拉下生物素化的靶标或用尺寸排阻色谱进行自动化缓冲液交换过程。最终，IMCStip 与 Hamilton microlab Star 自动液体处理系统相结合，具有多种模式，可以随着科学家的需求随时间变化而提供灵活性、一致性和进化兼容性。

我们感谢哥伦比亚南卡罗来纳大学的麦克 · 沃拉和比尔 · 科瑟姆在 LC-ESI-qTOF 上分析胰蛋白酶/溶解蛋白酶 C 消化的人类 IgG 样本。