概述

阿密曲替林是一种广谱的三环抗抑郁药物，环苯扎林是一种三环骨骼肌松弛剂，其在代谢中均形成季铵葡萄糖苷酸复合物。为了能够精确的定量这些代谢物，需对复合物进行水解。本研究比较了四种β-葡萄糖醛酸酶对这两种复合物的水解效率。

材料与方法

1.      药物标准品购于Cerilliant Corporation。IMCSzyme®购于Integrated Micro-Chromatography Systems, LLC。鲍鱼β-葡萄糖醛酸酶购于Campbell Science，帽贝及大蜗牛β-葡萄糖醛酸酶购于Sigma-Aldrich。

2.      样本准备：200 μL尿液+100 μL水解复合物（水解缓冲液，酶及内标）。于60℃进行水解。IMCSzyme®水解时间为30分钟，其余三种酶水解60分钟。

3.      水解后经RP-S枪头（DPX LLC）萃取，并用LC-MS/MS分析。

结果

阿密曲替林与环苯扎林葡萄糖苷酸复合物能够被IMCSzyme®完全水解，其余三种酶只能部分水解，且水解时间更长（图1）。图2（b，e）显示了使用了其余三种酶进行水解时，出现若干没有水解的葡萄糖苷酸复合物的峰，而IMCSzyme®水解后无葡萄糖苷酸复合物峰（图2 c，f）。

结论

与三种商业化的β-葡萄糖醛酸酶相比，IMCSzyme®对阿密曲替林与环苯扎林葡萄糖苷酸复合物的水解效率显著提高，且水解时间更短。其余的酶效率低可能由于酶溶液不纯，有杂质且对底物的亲和力不同。而IMCSzyme®是一种生物工程改良的β-葡萄糖醛酸酶，其高纯度高活性的特点使得催化效率更高。

图1. LC-MS/MS对阿密曲替林（a）与环苯扎林（b）的检测浓度。红色代表水解前分析物浓度。其余四种颜色分别代表用IMCSzyme®，大蜗牛，帽贝及鲍鱼水解后分析物浓度。

图2. 阿密曲替林（a-c）与环苯扎林（d-f）葡萄糖苷酸水解图谱。a,d未加酶，b,e加有鲍鱼β-葡萄糖醛酸酶，c,f为加有IMCSzyme®。

此项研究为IMCS总结于技术研究报告“Variations in enzymatic hydrolysis efficiencies for amitriptyline and cyclobenzaprine in urine.”（由Kaylee R. Mastrianni, L. Andrew Lee, William E. Brewer, Nagarju Dongari, Michael Barna and Stephen L. Morgan发表于2016年Journal of Analytical Toxicology）。
阅读原文