概述
传统尿液药物分析是用鲍鱼提取的β-葡萄糖醛酸酶进行的，然而，动物提取酶杂质含量高，酶活相对较低，对后期纯化要求较高，增加了实验的繁琐性。2014年，某疼痛药物监控实验室在美国临床化学（AACC）年会上提出：应用IMCSzyme®——一种新型重组的β-葡萄糖醛酸酶可更大的提高尿液中药物检测与分析效率。这项研究成果无疑为医学实验室的药物检测奠定了夯实的基础。
材料和方法
在正常尿液中加入去甲羟基安定（Oxazepam），氯羟去甲安定（Lorazepam）和羟基安定（Temazepam）三种安定药的葡萄糖苷酸，浓度为2500 ng/mL。进行三次平行实验。水解条件为：在最适温度55 ℃孵育5，15，30和60 min；室温下孵育0，5，10和15 min。随机挑选苯二氮卓类药物阳性患者的尿液样品用于比较分析IMCSzyme®和鲍鱼提取酶的相对水解效率。待测物通过TLX-4多通路高效液相色谱（HPLC）进行分离，层析柱为Cyclone-P 0.5×50 mm Turboflow column，并通过Thermo Scientific TSQ量子质谱进行分析。
结论
与提取自牛肝、罗马蜗牛、大肠杆菌和笠螺的β-葡萄糖醛酸酶相比，IMCSzyme®大幅度地提高了对尿液药物的分析准确性与水解效率。研究结果表明，鲍鱼β-葡萄糖醛酸酶需在55 ℃水解45 min，而IMCSzyme®则在室温就能快速完成苯二氮卓类葡萄糖苷酸的水解。IMCSzyme®通过节省实验时间，减少实验环节，极大地提高了研究效率。
图1. 水解时间的比较
图1：孵育时间和温度对重组β-葡萄糖醛酸酶水解去甲羟基安定（Oxazepam），氯羟去甲安定（Lorazepam）和羟基安定（Temazepam）的影响
表2.
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Analyte |
Abalone Target Range (ng/mL) |
IMCSzyme®（ng/mL） |
Mean % Hydrolysis*±standard deviation
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去甲羟基安定 |
45-2788 |
35-2708 |
90.5±10.1 |
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氯羟去甲安定 |
79-3838
|
37-5808
|
87.6±29.3 |
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羟基安定 |
33-4105
|
32-4361
|
99.1±7.8
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羟基阿普唑仑 |
34-3016
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54-5039
|
156.3±80.2
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阿普唑仑 |
38-1131
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31-1437
|
110.7±20.3 |
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去甲安定 |
24-1219
|
32-1512
|
150.8±89.7 |
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7-氨基-氯硝安定 |
489-1882 |
25-1740 |
86.0±15.9 |
室温下，0 min时，确诊患者尿样经重组β-葡萄糖醛酸酶水解产物的回收率。
* % 相对于鲍鱼提取酶水解浓度
参考文献
1. Rapid Enzyme Hydrolyis Using a Novel Recombinant b-glucuronidase in Benzodiazepine Urine Analysis. Poster Presentation by Ayodel A. Morris, Scott
A. Chester, Erin C. Strickland, and Gregory L. McIntire in Spring 2014, CAC Seminar
2. IMCSzyme® Package Insert, Catalog No. 04-E1F-050. Integrated Micro-Chromatography Systems, Columbia, SC, 2014.
This information was summarized by IMCS from “Rapid Enzyme Hydrolyis Using a novel recombinant b-glucuronidase in Benzodiazepine Urine Analysis” by Ayodele A.
Morris, Scot A. Cester, Erin C. Strickland and Gregory L. McIntire in the Journal of Analytical Toxicology 2014; 38:6 10 - 614
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