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AN0043 尿样中抗精神病安定类药物（Seroquel®, Latuda® 和 Haldol®）的快速分析
来源:IMCS | 作者:Erin C. Strickland | 发布时间: 3018天前 | 5478 次浏览 | 分享到:
传统的药物检测的样本是血液，然而尿液分析也是一个可行的方式。很多精神类药物的处方并不完善，为了提高阳性率，这三种安定类药物Seroquel®,Latuda® 和Haldol®的检测是通过检测其代谢产物而实现的。已知和未知的代谢产物用LC-QTOF联合水解检测。目前通过检测N-脱盐基喹硫平（N-desalkyl quetiapine）或7-羟基喹硫平（7-hydroxy quetiapine）来检测Seroquel®（喹硫平，Quetiapine）的含量，但只能检测到放射剂量的12%，本研究表明羧酸和亚砜代谢物对于确定患者的阳性率至关重要。据报道，较小的鲁拉西酮片段是Latuda®（鲁拉西酮，Lurasidone）中普遍存在的代谢产物，本研究表明，鲁拉西酮和羟基鲁拉西酮及未知的代谢物M-21，M-22都是尿液中Latuda®丰富的代谢物。有研究显示Haldol®（氟哌丁苯，Haloperidol）在代谢中不会发生复合物偶联，而是还原的氟哌丁苯和两个小的酸片段作为主要代谢产物，然而本研究显示氟哌丁苯发生了葡糖醛酸化，水解后提高了检测效率。

概述

传统的药物检测的样本是血液，然而尿液分析也是一个可行的方式。很多精神类药物的处方并不完善，为了提高阳性率，这三种安定类药物Seroquel®,Latuda® 和Haldol®的检测是通过检测其代谢产物而实现的。已知和未知的代谢产物用LC-QTOF联合水解检测。目前通过检测N-脱盐基喹硫平（N-desalkyl quetiapine）或7-羟基喹硫平（7-hydroxy quetiapine）来检测Seroquel®（喹硫平，Quetiapine）的含量，但只能检测到放射剂量的12%，本研究表明羧酸和亚砜代谢物对于确定患者的阳性率至关重要。据报道，较小的鲁拉西酮片段是Latuda®（鲁拉西酮，Lurasidone）中普遍存在的代谢产物，本研究表明，鲁拉西酮和羟基鲁拉西酮及未知的代谢物M-21，M-22都是尿液中Latuda®丰富的代谢物。有研究显示Haldol®（氟哌丁苯，Haloperidol）在代谢中不会发生复合物偶联，而是还原的氟哌丁苯和两个小的酸片段作为主要代谢产物，然而本研究显示氟哌丁苯发生了葡糖醛酸化，水解后提高了检测效率。

 

材料与方法

1.      样本为Seroquel®, Latuda® 和Haldol®阳性尿液。检测仪器为Agilent 6530 LC-QTOF。

2.      分析了三种抗精神病药物的已知和可能代谢物

3.      样本用250 ng/mL氢可酮-D6稀释五倍。

4.      为了确认分析物是否为葡糖醛酸化，使用3000 U的IMCSzyme®对样本于60℃进行水解60分钟。

5.      分析仪器为Waters Acquity UPLC® Xevo TQ-MS system，Waters Acquity UPLC® CSH Phenyl-Hexyl 2.1 x 50 mm, 1.7 μm column。

6.      流动相A，2mM乙酸铵+ 0.1％甲酸水溶液，起始于98％。

7.      流动相B在2.8分钟内以0.8mL / min的流速升至90％，100％甲醇？

8.      水解时，将Seroquel®和Haldol®样本用400μL含有0.2μg/ mL 喹硫平-D8或0.2μg/ mL 氟哌丁苯-D4加0.2M磷酸盐缓冲液（pH 7.5）和7,500 U / mL IMCSzyme®的预混液稀释5倍

9.      对非水解样本的检测，Seroquel®, Latuda® 和Haldol®样本用400 μL 0.1％甲酸内标液稀释五倍（0.2 μg/mL喹硫平-D8，0.2 μg/mL 氟哌丁苯-D4或0.9 μg/mL鲁拉西酮-D8）。

 

结果

表1为12个患者尿液中喹硫平的平均检测响应。结果说明喹硫平羧酸是浓度最高的代谢物，其次是N-脱盐基喹硫平和7-羟基喹硫平及喹硫平亚砜。

表1. 人尿液中喹硫平检测分析

*数值是相对于每个样本中都存在的内标氢可酮-D6的平均分析物响应，只为说明相对浓度。患者样本经处方和现行有效的确认方法检测为喹硫平阳性。喹硫平羧酸是最丰富的代谢物，其次是7-羟基喹硫平、N-脱盐基喹硫平和喹硫平亚砜。喹硫平羧酸和喹硫平亚砜的总鉴定分值高于7-羟基喹硫平和N-脱盐基喹硫平，对其鉴定具有较高的可信度。

表2为114个Seroquel®阳性样本水解和非水解的检测结果。结果表明水解对检测Seroquel®的重要性。水解后，喹硫平及7-羟基喹硫平检测分别提高95%及96%。喹硫平羧酸是浓最高的代谢物，说明了其对Seroquel®检测阳性率的重要性。最高的综合阳性率为48%及50%，与报道的精神分裂~60%违规率及48.1-69%躁郁症违规率相符合。

表2. Seroquel®阳性样本的水解检测分析


这些来自114个随机Seroquel®患者的三个代谢物7-羟基喹硫平，喹硫平羧酸和喹硫平亚砜水解和非水解的结果。水解后喹硫平和7-羟基喹硫平浓度分别显著增加~95%和~96%。同时表明了喹硫平羧酸对患者的积极影响。整体达到的最大阳性率为48 & 50%，与报告的精神分裂症的违规率为60%和躁郁症违规率为48.1% - 69%一致。

*所有浓度均以ng/mL为单位

结果表明了12个Latuda®样本的检测及8个鲁拉西酮代谢物的结果。鲁拉西酮及羟基鲁拉西酮是监测鲁拉西酮最理想的分析物。代谢物M-21及M-22没有标准品，所以鲁拉西酮的监测通过检测羟基鲁拉西酮来实现。

20个长期注射低剂量Latuda®（每天20 mg）的患者样本被用来检测并建立鲁拉西酮监测方法。鲁拉西酮，羟基鲁拉西酮，S-甲基-鲁拉西酮（M21），S-甲基-羟基-鲁拉西酮（M22）的检测结果与高剂量注射Latuda®的结果一致。

即使前期研究报道氟哌丁苯不会发生偶联，然而水解后，相当浓度的氟哌丁苯被释放。更多结果请查阅“Enzyme Hydrolysis of Haloperidol Glucuronide; A Major Urine Metabolite of Haldol®”。

结论

有研究报道LC-QTOF的准确性高于GC/MS。由于目前Seroquel®的是通过检测N-desalkyl喹硫平和7-羟基喹硫平来实现的，本研究通过检测喹硫平羧酸和喹硫平亚砜提高了检测的准确性，阳性率显著提高。用GC/MS检测Seroquel®是不理想的，因为羧酸及亚砜代谢物不适合高温和萃取方法，进而N-desalkyl喹硫平和7-羟基喹硫平相对是理想的分析物。

有研究显示Latuda®浓度最高的代谢物为小片段，然而本研究显示鲁拉西酮本身的浓度足够检测多数样本，与羟基鲁拉西酮一同检测可提高鲁拉西酮的检测效率。M-21和M-22同样可提高检测效率，但其标准品不可获得。

此项研究为IMCS总结于技术研究报告“Uromics: Metabolomics in Urine for Seroquel®, Latuda®, and Haldol®”（由Erin C.

Strickland - Amertiox, Ltd.发表于2016年MSACL会议）。


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