临床及毒理实验室常用液/固相萃取法（SPE）对尿液中药物进行分析。SPE处理的样本较为纯净，得到的结果可靠且可延长质谱等仪器的使用寿命。然而SPE方法的成本较高，因此越来越多的科研人员专注于开发使用“dilute and shoot (D/S)”方法获得高纯度样品。虽然D/S方法比较经济，且超灵敏，但其会降低LC柱子寿命，需要频繁的LC-MS/MS维护，样品需要反复上样，且数据分析时间较长。

分散型萃取枪头（Dispersive Pipette Extraction，DPX）的出现弥补了传统SPE方法的缺陷。萃取枪头中填加了悬散的填料，通过简单的吸打过程即可完成与样品的混合。DPX tips能完美地与自动液体移液器联合使用，使得样品纯化过程变得简单，其可在10分钟内同时完成96个样品的纯化。

材料与方法

1.      将酶解的样品，水，30%甲醇，含有1%甲酸的甲醇加入多孔板中，将多孔板载入TECAN EVO仪器。

2.      一块板加入200 μL水，另一块板加入150 μL含有1%甲酸的甲醇，并载入TECAN。

3.      安装将DPX-RP/WAX枪头，并用30%甲醇润洗。

4.      DPX枪头反复吸打水解样品三次。

5.      吸打水以洗去多余的盐，尿素和肌氨酸酐。

6.      用小量洗脱液对样品洗脱并浓缩。

7.      对于LC系统，将洗脱物稀释以获得需要的甲醇浓度：加入1050 μL水（总体积为1200 μL，12.5%甲醇）。

8.      检测分析仪器：Thermo TSQ Vantage triple quadrupole instrument，Agilent 1260 HPLC + Agilent Poroshell EC-C18 column (3.0 x 50 mm, 2.7 μm)。

结果与讨论

检测结果为线性的，准确可靠。校正系数R²大于0.99，浓度范围为12.5-400 ng/mL，多数范围在6.25-800 ng/mL。相对标准偏差（%RSD）在1.7-9.7%之间（4孔重复，400 ng/mL）。检测限（LODs）为3.3 σ/m，σ为最小校正点的标准差，m为曲线斜率。LODs范围在0.25-12 ng/mL。定量限（LOQs）为10 σ/m，范围在1.0-60 ng/mL（表1）。

不同的分析方法及LC-MS/MS的敏感性决定着LODs和LOQs的结果。为了将敏感性最大化，需要纯化更多的尿液样本，样品洗脱体积增加到500 μL。

结论

时间就是金钱，节省时间就是节约成本。与传统SPE方法相比，DPX tips联合高通量自动化系统在节省成本及时间的同时，减少了溶液使用量及废液量。更纯净的样品避免了重复上样，基质干扰及大型昂贵仪器。且纯净的样品可延长LC-MS/MS的使用寿命。DPX技术与Tecan Freedom EVO自动移液系统联合使用，可简便，快速地完成样品制备，是临床及毒理实验室理想的且完美的操作方法。

表1

DPX-RP/WAX tip纯化后待测物的回收率。化合物包括：鸦片及鸦片类似物，苯并二氮杂卓类，普遍滥用药，非鸦片类止痛药，抗痉挛药，镇静催眠药，兴奋剂，抗抑郁药及图中标注的代谢物。

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