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无锡微色谱生物科技有限公司

见微知著，样品分析，如虎添翼

AN0002 多种β-葡萄糖醛酸酶的性能比较及其相应水解产物的后处理过程研究
来源: | 作者:IMCS | 发布时间: 3131天前 | 4561 次浏览 | 分享到:
鸦片在缓解疼痛中的使用与日俱增，而对其使用的监测也变得十分重要。鸦片及其代谢物的检测通常用免疫测定和GC-MS分析，这些均涉及到样品的处理及净化。本研究旨在建立及验证一种更有效更精准的尿液中鸦片的检测方法，其涉及到β-葡萄糖醛酸酶的水解，蛋白沉淀及样品净化，LC-MS/MS分析。比较了四种β-葡萄糖醛酸酶及三种蛋白沉淀以确定用于鸦片样物质检测的最佳酶和平板。

表2. LC方法

%流动相A（10 mM 甲酸铵）

%流动相B（含有0.1%甲酸的甲醇）

时间（分钟）

80

20

0

60

40

0.7

0

100

4.5

0

100

6.0

80

20

8.0

结果

1. 实验表明IMCSzyme®对C6G及H3G的水解效率明显高于其它三种酶。

2. Supelco蛋白沉淀板的回收率最高（88-103%），基质效应影响最小。

3. 使用改良的LC-MS/MS方法检测62个患者尿液样品显示96.6%的GC-MS峰被检测出，而且也检测出一些额外的峰，这说明前期检测的阴性样本其实是阳性的。用传统LC-MS/MS方法检测的22个患者尿液样本，用改良的LC-MS/MS方法确认了93.3％的峰值。



图1.水解效率比较。样本为7中鸦片葡萄糖苷酸，孵育1小时。底物浓度为1 μg/mL。结果为平均值±SD。*p﹤0.05。

结论

此项研究表明，与其它三种β-葡萄糖醛酸酶相比，IMCSzyme®对鸦片的水解效率最高，而使用量是红鲍β-葡萄糖醛酸酶的一半。改良的LC-MS/MS方法及IMCSzyme®、Supelco沉淀板联合使用可获得最佳的尿液中鸦片检测结果。这种方法减少了样品的处理时间并提高了灵敏度。

此项研究为IMCS总结于技术研究报告“Development and Validation of a Novel LC-MS/MS Opioid Confirmation Assay: Evaluation of β-glucuronidase Enzymes and Sample Cleanup Methods”（2016, Journal of Analytical Toxicology. 40:5, 323-329）。

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