概述

烯丙羟吗啡酮是一种人工合成的镇定剂，可作为鸦片类拮抗剂抑制其过度使用。烯丙羟吗啡酮也常与丁丙诺啡（Suboxone®, Zubsolv®, Bunavail™ buccal film）一同使用，可防止药物滥用及产生脱瘾症状。美国的一家药物监测实验室选用IMCSzyme® -一种生物重组的β-葡萄糖醛酸酶对体内代谢产生的烯丙羟吗啡酮复合物进行水解（包括烯丙羟吗啡酮、脱氧吗啡酮及6β-纳洛醇）。本研究结果显示，在65℃孵育60分钟，约有70%的水解效率，足以满足要求的精准性及可重复性。

材料与方法

1.      在无药物的尿液中加入烯丙羟吗啡酮-3-葡萄糖苷酸3000 ng/mL，完全水解后可释放1952 ng/mL烯丙羟吗啡酮。每个样本中加入≥1631 U的IMCSzyme® 。每个样本做10孔重复，于55℃及65℃分别孵育0，15，30，45及60分钟。

2.      使用赛宝松（Suboxone）阳性样本证实最佳反应条件为65℃孵育60分钟。

3.      使用Waters Acquity TQD UPLC®-MS/MS 进行分析。

4.      分析物在Waters Acquity UPLC® BEH Phenyl, 1.7 μm, 2.1 x 50 mm, 100 Å column进行分离，温度为50℃。

5.      分析软件为Waters MassLynx software。

结果

选用11个浓度，五孔重复建立标准曲线，浓度从5 ng/mL至10000 ng/mL。烯丙羟吗啡酮与6β-纳洛醇的定量限与检出限为5 ng/mL。选用三个浓度（75，750，7500 ng/mL）及10孔重复进行精密度与准确度检测。准确度在±12.61%、%CV小于12.59%为可接受数据。

水解效率分析实验选用3000 ng/mL烯丙羟吗啡酮-3-葡萄糖苷酸，重复10孔（表1）。校正系数为1.41。

用建立的方法水解36个患者样本显示， 全部样本均显示为烯丙羟吗啡酮阳性（浓度为8.1-9623.5 ng/mL），19个样本显示为6β-纳洛醇阳性（浓度为﹤5.0-186.6 ng/mL）。

结论

表1. 水解效率及校正系数

参考文献

1. R. C. Baselt. Disposition of toxic drugs and chemicals in man, 10th edition. Biomedical Publications, Seal Beach, CA, 2014.

2. W. B. Fang, Y. Chang, E. F. McCance-Katz, and D. E. Moody, Determination of naloxone and Nornaloxone (Noroxymorphone) by High Performance Liquid Chromatography-Electrospray Ionization, J. Anal. Tox. 33, 2009, 409-417.

3. P. Heikman, M. Haddinen, M. Gergo, and I. Ojanpera, Urine Naloxone Concentration at Different Phases of Buprenorphine Maintenance Treatment., Drug Treatment and analysis, 6, 2014, 220-225.

此项研究为IMCS总结于技术研究报告“Development of an LC/MS-MS Naloxone Hydrolysis Assay Using a Recombinant Beta-Glucuronidase for Urinalysis”（由Gregory L McIntire - Ameritox, Ltd.发表于2015年SOFT会议）。